PCR结果为何会出现“假阳”,如何避免?

如何避免PCR结果出现“假阳”
2023-12-20
来源:

PCR技术在疫病诊断,疫情控制等方面成为了有力工具。但由于PCR技术的高度敏感性,PCR技术要求高、影响因素多,从样品制备到结果的产生,任何一处细微的失误均会造成结果的偏差,导致样品的假阳性结果。PCR结果为何会出现“假阳”,如何避免?

检测方法试剂灵敏性高/特异性差:

使用高灵敏度/特异性差的检测试剂盒对样品检测时,可能会出现非特异性扩增造成假阳性。如果出现异常样本可对实验环境进行消毒后,进行提取/核酸样本设置数个平行对照复检。也可使用质控良好多家试剂盒进行对照复测。如有需求可对样品进行抗体检测或使用其他检测方法复测。

可使用缔一生物提供的德国MB公司Venor®Gem qEP   支原体qPCR检测试剂盒,符合欧洲药典EP、美国药典USP、日本药典JP、中国药典等各国药典要求,可在细胞和生物制品,如Car-T、细胞免疫、抗体药、疫苗等项目中,替代培养法进行支原体检测。高特异性!一次检测即可涵盖,所有可能感染细胞的支原体物种。高灵敏度!检测限可达≤10CFU/ml

阳性样本交叉污染:

采集样本时操作不规范导致批次样本出现污染:使用一次性采样器具进行样品采集。同一批次不同样品单独隔离存放。样本处理前对实验耗材及实验室操作环境及时消毒。收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢:保证样本运输及样本预处理前严格密封;样本预处理前对包装外表面进行消毒处理。样本处理前后对实验耗材及实验室操作环境及时消毒。样本前处理时确认样本液体无外溢和离心管盖完全密封,一旦出现外溢需立即清理消毒防止交叉污染。样本前处理时正确佩戴一次性手套和及时对手套进行消毒。实验过程中的不规范操作造成阳性样本样本交叉污染。每次实验前移液器,离心管板架等实验器具及耗材消毒灭菌。不同样本使用移液器移液时需更换滤芯移液枪头。加样及移液时避免反复吹吸造成样本液体外溅或导致形成气溶胶造成气体扩散污染。不同样本不同时开盖,样本震荡时需保证离心管或PCR反应管盖盖紧。PCR反应管上机时管盖必须盖紧,避免反应时高温反应液气体泄漏,影响仪器判读及造成核酸对环境的污染。正确佩戴及勤换手套,实验操作过程中全程穿戴防护服。实验结束后一次性耗材与实验室垃圾使用氯制剂喷洒或浸泡消毒后再处理。

3病毒DNA气溶胶污染(环境、仪器、人员、试剂、耗材)

对实验室环境进行合理分区,保证核酸提取室和配液室分区,不同分区的实验室耗材、仪器不共用。
实验室环境定期使用含氯制剂进行核酸消毒,荧光PCR仪使用75%酒精进行消毒,消毒后用纯净水擦拭。实验室定期采样自检,实验室出现病毒核酸污染后需对实验室人员及环境进行全面消毒及采样自检,全部阴性后再正常启用实验室。

4仪器设备存在判读问题或曲线阈值异常:

仪器软件和电脑软件的匹配度低,仪器荧光通道、信号处理系统不稳定:使用目前市场上质量品控良好的荧光PCR仪。

实验室用电环境电压不稳、断电: 可对实验室接入电源和稳压设备。

荧光PCR系统ROX参比荧光未修改:取消荧光PCR仪软件程序ROX参比荧光读取。

反应体系内存在异物,反应体系的

PCR耗材品质差:使用品质合格的

PCR耗材:密封性能好,低蒸发,管盖易开合。

透明部位透光性好,导热精确,低吸附。

采用优质医疗级PP原料生产,耐热性好。

DNaseRNasePyrogen

PCR耗材在受控的万级无尘车间生产。

下一篇:这是最后一篇
上一篇:这是**篇