PCR实验中Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶介绍
PCR实验中Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶介绍。
DNA聚合酶是一类酶的总称，有多种种类，每种都具有不同的特性和应用。今天跟大家介绍的就是Taq DNA聚合酶和Pfu DNA聚合酶。
Taq DNA聚合酶
来源
从耐热细菌Thermus aquaticus中分离得到。
特点
耐热性：Taq DNA聚合酶的适宜工作温度通常在70°C至75°C之间。这使得Taq DNA聚合酶非常适合PCR反应，因为PCR需要在每个循环中通过高温步骤来分离DNA链。
5'→3'聚合酶活性 Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性，即它能够在DNA链的5'端到3'端方向上合成新的DNA链。
没有3'→5'外切酶活性 与一些其他DNA聚合酶不同，Taq DNA聚合酶不具备3'→5'外切酶活性，这意味着它缺乏校正能力，容易引入突变。因此，在PCR反应中，Taq DNA聚合酶的错误率相对较高。
DNA模板依赖性：Taq DNA聚合酶对于DNA模板的依赖性较强，需要引物（primer）提供3'端的OH基团，作为新DNA链的起始点。
Pfu DNA聚合酶
来源
从嗜热古细菌Pyrococcus furiosus中分离得到。
特点
高度的3'→5'外切酶活性：Pfu DNA聚合酶表现出高度的外切酶活性，使得其能够进行校对，纠正PCR反应中可能发生的错误。这有助于提高扩增产物的准确性。
高保真度：由于其强大的外切酶活性，Pfu DNA聚合酶在PCR反应中具有更低的错误率，提供高度保真的DNA合成。
温度适应性：Pfu DNA聚合酶在较高的温度范围内（通常在72°C至75°C）表现出较高的活性，适用于PCR反应的高温步骤。
缺乏5'→3'外切酶活性：与一些其他聚合酶不同，Pfu DNA聚合酶通常不具备5'→3'外切酶活性，因此不会引入额外的5'端修饰。
德国Minerva Biolabs公司生产的 Taq DNA聚合酶是一种高效的5‘→3’聚合酶，没有3‘→5’外切核酸酶活性。在72℃和pH9的条件下，MB Taq DNA聚合酶达到其最高水平的活性，能够在30秒内扩增1 kb DNA。
Taq的活性在室温时被阻断，例如在准备样品时。当温度高于70℃时，Taq聚合酶的抑制被完全逆转。在94℃2分钟后聚合酶达到完全活化。MBTaq DNA聚合酶带有10x缓冲液，能获得更大产率和灵敏度，这应符合大多数标准应用。
MB Taq 热启动DNA聚合酶推荐使用/范围：
常规和多重PCR；实时PCR；T/A克隆；生物素/地高辛或放射性核苷酸进行DNA标记；双链或单链标准DNA测序。
