在临床相关的项目中支原体放行检测发挥着重要的作用。由于临床项目研究的时效性与安全性，对于支原体检测的效率以及准确度都有比较高的要求。今天分享的是结合德国MB支原体检测产品进行支原体放行检测的方法步骤。
支原体DNA提取
如果样品的细胞培养液中，存在抑制PCR的物质，比如较高浓度的血清浓度（超过12%），则容易对下游的PCR反应会产生抑制，此时就需要对样品进行预处理，也就是对支原体DNA进行提取处理，以减轻对PCR反应的影响。
另外，酚红、细胞团、疫苗、冻存细胞和石蜡包埋的组织，也会对qPCR的检测产生干扰，因此也需要提前对支原体DNA进行提取
如果样品中蛋白含量高于10mg/ml，则先需将样品预先用蛋白酶K进行处理。
Miverva Biolabs公司的支原体DNA提取试剂盒，通过对DNA的提取，来提高检测的准确率。
Minerva Biolabs公司生产的Venor®GeM Sample Preparation Kit可从细胞上清和生物制品中分离支原体DNA，全程只需30分钟。
分四步组成：细胞溶解，DNA特异性与层析柱结合，祛除残留的污染物和抑制剂，洗脱DNA。该试剂盒符合欧洲药典规范。
支原体qPCR检测
药典中记载的传统的支原体检查方法，如培养法和DNA染色法，都存在一定的局限：培养法大约需要7-29天，DNA染色法大约需要4-14天才能出结果，所需时间较长，且DNA染色法还存在假阳性和假阴性情况。
支原体核酸检测法（包括常规PCR和荧光定量PCR，简称qPCR）是一种较早被国外采用的检测方法，以其操作时间短（仅需2-3小时）、灵敏度和特异性高而深受相关从业人员的喜爱，药典中也明确指出，经过验证，核酸法可替代指示细胞法进行支原体检测。
国内外药厂放行检测（product release testing）采用的较多的是德国Minerva Biolabs(简称MB)公司的Venor® Gem qEP (qPCR法)，无须跑胶，且能定量，使用起来更为便捷，通过欧洲药典和日本药典的方法学验证。
支原体标准品
标准品就像支原体检测过程中的一把标尺，能够衡量方法是否达到标准，合乎要求。药典中也规定了，如果要用核酸法替代药典方法，也需要进行验证，即灵敏度、特异性以及耐用性等都需要达到指定的要求。方法达到要求之后才能够用于质检部门对样品的检查。国MB公司（Minerva Biolabs）提供有三类标准品：灵敏度标准品、特异性验证用标准品，以及支原体DNA。
标准品与支原体DNA提取试剂盒、支原体qPCR检测试剂盒，共同构成完整的检测体系，帮助从业者实现高效便捷准确的支原体检测