有效避免假阴性、假阳性—生物制品支原体检测解决方案
在动物细胞培养中，支原体污染是常见的污染物。中国药典（2020版）推荐培养法和指示细胞培养法检测支原体，同时也明确可采用国家药品检定机构认可的其他方法。近年来监管机构不断发布指导文件明确鼓励采用新的快速检测技术。
中检院发布的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》提到：“鼓励研究者开发快速的支原体检查法用于中间过程监测或放行检测，但在临床试验过程中必须对快速方法进行充分的验证，证明所用快速方法的最低检出限至少不能低于药典方法”。
欧洲药典、日本药典和美国药典等都推荐了核酸扩增方法（NAT）用于支原体检测，在经过验证之后可以替代传统培养法或指示细胞培养法，用于过程控制或放行检测。目前已有多个IND成功的细胞或基因治疗产品使用核酸扩增方法（NAT）的检测试剂盒（qPCR法检测试剂盒）进行放行检测。
德国MB支原体检测试剂盒（荧光探针qPCR法）英文：Venor®Gem qEP，按照欧洲药典EP 2.6.7和日本药典支原体检测相关指南和要求进行开发设计和方法学验证（搭配MB支原体DNA提取试剂盒）），检测限可达10 CFU/mL并和药典培养法平行对比验证，符合《欧洲药典》和《日本药典》的方法学验证要求,可用于基础研究及工业生产中，样本的支原体qPCR快速检测特别是细胞治疗，抗体药生产、疫苗生产等临床项目，支原体的快速检测和产品放行。
支原体qPCR检测试剂盒特点
1.内控对照为独立包装，遵循欧洲药典和日本药典操作流程。
2.高特异性，一次检测即可涵盖所有常见易感染细胞的支原体物种（包括欧洲药典规定的9种支原体）。与细菌和真核DNA无交叉反应。
3.高灵敏度，最低检测限可达到≤10CFU/ml。
4.相应配套的支原体基因组DNA和细菌基因组DNA，便于特异性验证。
5.有相应配套的支原体绝对定量标准品，便于最后定量检测。
支原体qPCR检测试剂盒操作步骤
第1步：样本处理
a.细胞培养上清
b. 生物药或需遵循药典的样本
说明：①样品基质可能会影响检测的灵敏度。收集和筛选更高的样品量可提高测定灵敏度。
②细胞培养物样本含丰富的DNA酶，在低温下也能降解支原DNA，影响检测灵敏度。
建议：样本做DNA抽提处理，实现最高灵敏度。
推荐：德国MB公司生产的专用支原体DNA提取试剂盒
Venor® Gem Sample Preparation Kit
该DNA抽提试剂盒已经过广泛验证。
第2步：试剂制备
a.冻干粉溶解
b. 反应体系制备
b1) 样品为细胞上清筛查——反应体系制备
b2) 样品为生物药——反应体系制备
第3步：启动荧光定量PCR仪
第4步：结果判别
FAM通道：检测支原体荧光信号。HEX通道：检测内控对照荧光信号。
支原体DNA和内控DNA存在信号的竞争性抑制。
支原体DNA越多，FAM通道信号越高，检测内控对照的HEX通道信号越低。
定量需基于Ct值和DNA标准曲线。
Ct＜40为阳性结果。Ct≥40为阴性结果。
示意图：
储存条件
2~8℃保存至少12个月。复溶后-18℃以下保存。