细胞房支原体污染是一个严重的问题,可能影响到细胞培养的质量和实验结果。为了彻底消毒并消除支原体污染,可以采取以下措施:
一、物理消毒方法
紫外线消毒:
利用特定波长的紫外线对空气、物体表面及水进行消毒。
紫外线具有杀菌作用,能够破坏微生物DNA结构,使其失去活性而死亡。
适用于细胞房空气和物体表面的消毒,但需注意紫外线对人体有一定的伤害性,消毒时应避免人员在场。
高温消毒:
将被污染物品置于高于一定温度的环境中持续一段时间,以杀灭其中的病原体。
高温条件下可导致支原体蛋白质变性凝固,进而丧失生物活性。
一般建议使用超过56℃的条件处理30分钟以上。但需注意高温可能对部分实验器材和试剂造成损害,应谨慎使用。
二、化学消毒方法
75%酒精消毒:
通过擦拭或喷洒的方式对物品表面进行处理。
酒精能有效抑制细菌繁殖并将其杀死,对于支原体也有一定的杀灭效果。
使用时需避开明火,以免引起火灾。
过氧化氢消毒:
使用过氧化氢(H2O2)溶液进行喷雾消毒。过氧化氢具有强氧化性,能有效氧化支原体,破坏其细胞壁及抗生素抗性基因。
在实施过氧化氢消毒前,需要对污染的空间进行全面的清洁,如清除垃圾、废弃物和细菌携带物。
使用过氧化氢消毒时,应注意控制室内湿度,湿度过高可能导致支原体再生并抵抗氧化性物质。建议湿度不超过85%。
消毒后可使用电动吸尘器将气溶胶中的残留支原体吸走,必要时可重复消毒过程以达到**效果。
含氯消毒剂:
包括漂白粉、次氯酸钠等产品,可通过涂抹、喷洒等方式使用。
含氯消毒剂中的氯离子可使细胞壁蛋白变性失活,从而起到杀菌作用。
适用于多种病原体包括支原体的消毒,但需注意其对金属和某些非金属材料的腐蚀性。
三、专业设备消毒方法
过氧化氢干雾消毒机:
利用先进的雾化技术将过氧化氢转化为干雾状态进行空间消毒。
干雾微粒均匀,能够迅速弥漫充满整个密闭空间,不留死角。
灭菌效率高,且对人体和环境安全。
适用于细胞房、无菌室等环境的整体消毒。
紫外线空气消毒器:
结合紫外线杀菌和空气过滤技术,对细胞房内的空气进行持续消毒。
能够有效杀灭空气中的支原体和其他微生物。
使用方便,可根据需要设定消毒时间和模式。
四、加强细胞间管理,是解决细胞污染真正有效的方法
汇总了各大实验室的工作流程:
1、在正式进入细胞间前,需要在缓冲隔离间佩戴好细胞实验室专用的防护用具:口罩、防护服、鞋套等,开始实验前,佩戴好手套。
2、定期使用Mycoplasma-off™喷雾剂(或湿巾),对工作区域彻底消杀(建议半个月一次,但需根据细胞间实际使用频率决定)。
3、每次实验开始前,和实验结束后,用紫外线对细胞间进行照射消毒,实验操作前用酒精或Mycoplasma-off™喷雾剂对操作人员的手套进行喷涂消毒。
4、在水浴锅或培养箱水槽的水中,加入0.5%的Water Shield™,可确保一个月内水源不会变成支原体、真菌或细菌的污染源。
5、如果细胞间内,发生多株细胞的联合的支原体污染情况,建议在做上述1-4的操作的同时,将液氮罐,也用Mycoplasma-off™喷雾剂(或湿巾)进行彻底消杀,并更换洁净的液氮,(液氮罐中冻存的细胞发生支原体污染,也会在液氮中引起污染的的传播)。