产品中文名称：MycoQSearch™ qPCR支原体检测试剂盒(EP)
产品英文名称：MycoQsearch™ Mycoplasma qPCR Detection kit (EP)
货号 | 品名（EP欧洲药典） | 规格 | 价格 |
QDEP-100 | MycoQSearch™ qPCR支原体检测试剂盒(EP) MycoQsearch™ Mycoplasma qPCR Detection kit (EP) | 100次/盒 | 询价 |
一、产品原理：
MycoQSearch™支原体qPCR检测试剂盒采用探针法实时荧光PCR（qPCR），用于检测细胞培养物中的支原体污染。试剂盒包含引物 探针混合液；FAM标记探针特异性识别支原体物种，HEX标记探针用于检测内对照DNA。
引物针对支原体基因组高度保守的16S rRNA编码区设计，可检出细胞培养常见污染支原体：口腔支原体、猪鼻支原体、精氨酸支原体、发酵支原体、莱氏无胆甾原体、人型支原体、肺炎支原体、唾液支原体、柠檬螺原体、滑液支原体以及脲原体。本试剂盒不会扩增真核生物DNA以及其他细菌DNA。
二、产品特点：
1、用于生产细胞株与生物制品的支原体检测（符合欧洲药典EP、日本药典JP 、韩国食品药品安全部MFDS要求）；
2、采用水解探针法实时荧光定量 PCR（qPCR）（FAM标记探针:支原体；HEX标记探针：内参IAC）；
3、高灵敏度：单反应1~10拷贝靶DNA，实际样品灵敏度取决于核酸提取质量；
4、特异性：不检出与支原体亲缘关系相近的其他菌种；
5、UDG防污染体系：防止扩增产物交叉污染（携带污染）；
6、检测时长：视qPCR仪器，总检测可控制在3小时以内。
三、试剂盒主要组分：
组分 | 管盖颜色 | 用途 |
2× qPCR Master Mix | 蓝色 | qPCR扩增预混液，含dUTP |
Primer and Probe Mix | 琥珀色 | FAM/HEX引物 探针混合液 |
Internal Amplification Control DNA for sample prep | 紫色 | 提取前加入，提取内对照IC（实验主要质控） |
Internal Amplification Control DNA | 橙色 | 内对照DNA原液 |
Positive Control DNA | 黄色 | 支原体阳性对照模板 |
50× ROX参比染料（Low-ROX / High-ROX） | 琥珀色 | ABI仪器荧光归一化校正；其他平台不加ROX |
DNase Free Water | 白色 | 无酶水 |
四、标准实验流程要点（EP2.6.7）
1、取1 mL细胞培养液，15000 rpm离心10min，沉淀支原体，弃上清；
2、核酸提取（以Qiagen QIAamp UCP Pathogen Mini Kit为例）：加入蛋白酶K的同时，加入20μL紫色管IC内对照DNA，56℃裂解；后续按试剂盒完成提取，洗脱体积50μL；
3、qPCR总体系30μL；模板上样量5μL；
4、qPCR程序：
a.（选配UDG：增加37℃孵育步骤）
b.预变性：95 ℃，5 min
c.45循环：95 ℃, 20 sec；60 ℃ 30 sec；72 ℃ 30 sec
5、荧光采集：FAM（支原体）、HEX/VIC（内对照IC）
五、结果判读
FAM(支原体) | HEX/VIC(提取内对照IC) | 判读结论 |
Ct＜40 阳性 | 阳性 | 支原体阳性 |
Ct＜40 阳性 | 阴性 | 支原体阳性 |
阴性 | 阳性 | 样品无支原体污染，实验有效 |
阴性 | 阴性 | PCR抑制或样品前处理失败，结果无效，需复测 |
六、ROX染料选型简表
1、High-ROX高ROX：ABI老机型：7000/7300/7900HT/StepOne系列
2、Low-ROX低ROX：ABI7500、QuantStudio系列；Stratagene MX系列
3、No-ROX不加染料：Bio-Rad、Roche、Qiagen Rotor-Gene、Eppendorf等非ABI平台
七、关键注意点
1、反复冻融损伤试剂，频繁使用建议分装 -20℃保存；
2、推荐使用滤芯枪头，设置独立核酸配制区，降低气溶胶污染；
3、本试剂盒内对照为提取阶段加入的IC（提取内对照），同时有IAC扩增内参，可以同时监控提取损失与PCR抑制，
4、UDG酶为外购耗材，试剂盒不包含，不用UDG则无dUTP UNG防污染能力。
八、储运与有效期
运输与储存：-20℃
有效期：详见外包装失效日期
(缔一生物)
本网站所有注明“来源：缔一生物”的文字、图片和音视频资料，版权均属于北京缔一生物网站所有。非经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，否则将追究法律责任。取得书面授权转载时，须注明“来源：缔一生物”。